齐昭一系推崇扶桑皇室终于酿成了苦果——当然，齐昭等人可能还志得意满，认为这是坚持了自身主张、终于对与之不和的幕府老中们做出了反击。
安政五年（1858年）三月，廷臣八十八卿列参事件终于发生了：
出于对开国通商的恐惧，在获得齐昭一系的支持后，京都小朝廷拒绝了幕府申请的赦许，正式对《扶桑米人通商约定》说不！
以公卿久我建通、中山忠能、三条实爱、岩仓具视、大原重德等人为首，八十八位所谓的堂上公家集体当面向皇室请命，之后又有一百五十余中下级公卿上书声援，最终使幕府首席老中堀田正睦等人无功而返。
自德川幕府建立以来，这是二百多年来重未发生的大事——京都小朝廷第一次明确拒绝了幕府的重大请求！
因此事幕府的权威受到了重大的打击。
但出于左右逢源的想法，扶桑小朝廷并没有彻底倒向齐昭一边——在继嗣问题的内敕上并没有体现出倾向。
四月二十一日，出使京都的堀田、川路、岩濑等人回到了江户，得知结果的幕臣纷纷哗然，“一向软弱的小朝廷居然拒绝赦许，谁给他们的胆子！”
因此矛头自然指向了一直号召尊崇皇室的齐昭一系，而且相当多的“忠义”幕臣开始对堀田一系不满，认为其过于软弱才给别人留下了可乘之机。
四月二十三日，不满齐昭一系的幕臣联合起来，将彦根藩主井伊扫部头直弼推举为“大老”——根据传统，大老是幕府在非常时期设立的役职，仅设一人，统辖政务、决策机要，位在老中之上。
在此之前，幕府一共有十一任大老，而任命都发生在幕政动**不安之时。而之前井伊家已经出了六任大老，并且在任上都有所作为，因此新任的直弼被视为挽救幕政危局的希望。